Southern blot là gì

Pmùi hương pháp lai Southern blot là cách thức lai thân DNA của tế bào với mẫu dò DNA. Phương pháp này có thể chấp nhận được nghiên cứu và phân tích DNA của bộ gene, bình chọn hiệu quả gửi ren hoặc kiểm soát sự có mặt của một ren làm sao kia trong cỗ gen của tế bào.Southern blot - một kinh nghiệm chủ yếu vào vấn đề so với cấu tạo của ren, được trở nên tân tiến vào giữa thập niên 1970 vì Edwin Southern ngơi nghỉ MRC một cỗ phân của genome động vật hữu nhũ ngơi nghỉ Edinburgh (Southern, 1975).




Bạn đang xem: Southern blot là gì

*
*



Xem thêm: Sự Khác Nhau Giữa Spo2 Và Sao2 Là Gì, Phân Tích Giống Và Khác Nhau

quý khách hàng đã xem trước đôi mươi trang tư liệu Phương pháp southern blot, giúp thấy tư liệu hoàn chỉnh bạn cliông chồng vào nút ít DOWNLOAD ngơi nghỉ trên


Xem thêm: Link Download Office 2016 Pro Plus Bản Chính Thức + Bản Quyền Vĩnh Viễn Giá 400K

GVHD:Trần Thị DungSVTH:Nguyễn Thị Hoàng Yến61103239Nguyễn Văn Cư61103020Huỳnh Thị Mai Thy61103315MÔN KỸ THUẬT DI TRUYỀNPHƯƠNG PHÁP SOUTHERN BLOTMục lục:I. Giới thiệu về phương thức Southern blot.II. Nguim lý và bề ngoài.1.Nguim lý.2.Ngulặng tắc.III. Tạo chủng loại dò.1.Tạo mẫu mã dò dựa vào Plasmid2.Tạo Probe nhờ vào áp dụng PCR3.Đánh dấu ProbeIV. Quy trình của phương thức Southern Blot.1.Giai đoạn 1.2.Giai đoạn 2.3.Giai đoạn 3.V. Ứng dụng.Giới thiệu về phương thức Southern blotPhương thơm pháp lai Southern blot là cách thức lai thân DNA của tế bào với mẫu dò DNA. Phương thơm pháp này cho phép nghiên cứu và phân tích DNA của cục gene, kiểm soát tác dụng gửi gene hoặc chất vấn sự xuất hiện của một gene như thế nào kia vào bộ ren của tế bào.Southern blot - một kinh nghiệm đa số trong bài toán so với cấu tạo của ren, được phát triển vào thân thập niên 1970 bởi vì Edwin Southern ngơi nghỉ MRC một bộ phân của genome động vật hoang dã hữu nhũ sinh hoạt Edinburgh (Southern, 1975). Edwin Southern Pmùi hương pháp Southern Blot được tiến hành nhờ một vài chuyên môn căn cơ của technology sinch học phân tử như:Tách chiết genPCRThđộ ẩm tích các phân tử acid nucleotide lên màng laiLai phân tử (lai với mẫu mã dò sệt hiệu)Đến nay, chuyên môn lai Southern đã được cải tiến đi rất nhiều, đa số bao gồm: Tăng độ nhạy bén Giảm một số trong những bước trong quá trình laiGiảm thời hạn thực hiện Vẽ kinh nghiệm ngày nay đơn giản dễ dàng rộng không hề ít.II. Nguim lý với Nguyên tắcIII. Tạo chủng loại dò (probe)Tạo mẫu dò nhờ vào PlasmidCắt plasmid và DNA vẫn tách tách từ bỏ tế bào vị và một các loại enzyme.Gắn DNA vào plasmid trong ĐK môi trường xung quanh cân xứng.Thực hiện đổi mới hấp thụ vào trong tề bào vi trùng.Nhân những tế bào vi kuẩn và tinh lọc.Tách plasmid trường đoản cú những tế bào tinh lọc.Tách mẫu dò (đoạn DNA).Đánh lốt mẫu dò.Tạo Probe nhờ áp dụng PCRThiết lập mồi với khắc ghi pngóng xạ vào những mồi.Biến tính chủng loại DNA thành các sợi đơn.Gắn mồi vào những tua đơn.Tổng phù hợp những sợi DNA new.Biến tính nhằm tách bóc những chuỗi bắt đầu vừa tổng hòa hợp thành các sợi solo.thường xuyên trở lại thêm mồi vào những tua đối kháng.Đánh lốt mẫu mã dòGồm tất cả 4 hướng pháp:Phương thơm pháp Nick-translationPhương pháp random primingPmùi hương pháp đánh dấu các oligonucleotidePhương thơm pháp tạo mẫu mã dò RNA (riboprobe)Phương pháp Nick-translationDNAse I sản xuất những khía trên DNA sinh hoạt nhiều địa điểm hốt nhiên khác biệt.DNA polymerase với hoạt tính exonuclease 5’-3’, cắt mạch DNA theo hướng 5’-3’ theo các khía đang tạo sẵn, đồng thời, tổng hợp bù đoạn thiếu thốn với sự tđắm say gia của nucleotide đánh dấu (hay là dATP)Kết quả là DNA được đánh dấu.Pmùi hương pháp random primingDNA kép được thay đổi tính bởi nhiệt thành 2 mạch đối kháng.Hỗn đúng theo các oligonucleotide tổng phù hợp được tiếp tế, biến hóa mồi (primer) mang lại DNA polymerase tổng đúng theo mạch bổ sung.Một vào 4 loại nucleotide bổ sung vào được khắc ghi, yêu cầu 2 mạch mới tổng phù hợp cũng được khắc ghi.3. Phương thơm pháp ghi lại những oligonucleotideCác oligonucleotide được tổng hợp dưới dạng mạch đối kháng rồi được khắc ghi ở đầu 5’ nhờ enzyme T4 polynucleotide kinase với việc hiện diện của một nucleotide lưu lại. Sau làm phản ứng những nuclotide tự do cũng khá được vứt bỏ bởi nhan sắc kí lọc gel, sắc đẹp kí lỏng cao áp (HPLC),4. Pmùi hương pháp sản xuất mẫu mã dò RNA (riboprobe)Trước hết, trình từ DNA dùng làm cấp dưỡng mẫu mã dò RNA cần được chuyển vào trong 1 vector tất cả với các promoter.Vector này được cắt ra thành dạng mạch thẳng; kế tiếp, RNA polymerase phù hợp được phân phối phản bội ứng cùng rất những nucleotide khắc ghi.RNA polymerase đã phiên mã trình trường đoản cú DNA bước đầu từ promoter, tạo thành một lượng mập RNA ghi lại.Sau bội phản ứng, vector gồm mang trình tự DNA nơi bắt đầu bị DNase I phân diệt, các enzyme được loại trừ qua bóc tách chiết bởi phenol với RNA được tinc sạch mát trên sắc kí lọc gel.IV.Quy trình của cách thức Southern blotGiai đoạn 1Giai đoạn 2Chuyển DNA vừa biến hóa tính lên màng lai (màng nylon hoặc nitrocellulose). Nguim tắc của vượt trình:Là sự mao dẫn của dung môi (thường là NaOH/NaCl)qua lớp gel tự vị trí gồm nạm nước đảm nhiệm nơi có cố nước rẻ, sở hữu theo DNA lắp lên màng lai được sắp xếp ngay lập tức trên lớp gel.Quá trình này diễn ra trong một vài giờ hoặc hoàn toàn có thể dùng thứ thnóng hút ít chân ko.Tương tác ion thân màng lai (tích năng lượng điện dương) cùng DNA (tích năng lượng điện âm) sinh sản lực hút, kết nối những DNA lên màng lai.Trong quá trình chuyển, địa chỉ các DNA ko biến đổi.Màng lai sau quá trình trên, được xử lý nhiệt (800 trong 2 giờ) hoặc chiếu tia UV (vài phút) để thắt chặt và cố định DNA trên màng.Cách tiến hành:Đặt gel lên giá chuyển vật dụng Bloting để đưa nguim vẹn những sợi DNA thay đổi tínhDung dịch dẫn đưa là NaOH 0.4MMàng lai sẽ giữ lại được thế dịnh những đoạn DNA được chuyển lên từ gel điện liGiai đoạn 3IV.Ứng dụngSouthern blot được sử dụng nhằm Review bản copy của ren vào genome, xác định các intron, exon, các đoạn bị tự dưng biến chuyển thêm hoặc mất đoạnkhi sử dụng những DNA marker khác biệt làm chủng loại dò, hoàn toàn có thể minh bạch được các loài, các loại đồng hình.Southern blot – RFLP : góp phạt hiện sự đa dạng và phong phú chiều nhiều năm các đoạn cắt do RE, thông qua đó, phân biệt sai biệt di truyền ở trong phần nhận thấy của những RE dẫ đến sai biệt vào chiều nhiều năm của các đoạn DNA tạo thành từ RE kia. Đòng thời RFLPhường còn sử dụng nhằm xác định huyết tộc, lập phiên bản đồ gia dụng số lượng giới hạn gen.Truy tìm kiếm tội nhân phụ thuộc vào vết tích hiện trường.Chuẩn đoán thù căn bệnh tnhì nhi.Tài liệu tsi khảo:Sinch học phân tử - Hồ Huỳnh Thùy Dươngwww.Wikipedia.orgTHE END THANKS FOR WATCHING !

Chuyên mục: Công Nghệ